聊一聊平板菌落計數(shù)法具體指的是什么
更新時間:2022-08-30 文章更新于2022-08-30 點擊次數(shù):1300次
菌落是指細菌在固體培養(yǎng)基上生長繁殖而形成的能被肉眼識別的生長物,它是由數(shù)以萬計相同的細菌集合而成。當樣品被稀釋到一定程度,與培養(yǎng)基混合,在一定培養(yǎng)條件下,每個能夠生長繁殖的細菌細胞都可以在平板上形成一個可見的菌落。
平板菌落計數(shù)法是指在活菌培養(yǎng)計數(shù)時.由單個菌體或聚集成團的多個菌體在固體培養(yǎng)基上生長繁殖所形成的集落.稱為菌落形成單位,以其表達活菌的數(shù)量。菌落形成單位的計量方式與一般的計數(shù)方式不同,一般直接在顯微鏡下計算細菌數(shù)量會將活與死的細菌全部算入,但是CFU只計算活的細菌。因此,可將菌液倍比稀釋成不同濃度,每種濃度吸1毫升加到融化溫度達50度的15毫升營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)中混勻使其凝固,置35度孵育24小時,取出進行菌落計數(shù),每個平板菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)得到每毫升中細菌數(shù)量,取平均值即可得到較準確的CFU/ml,一般對平板進行菌落計數(shù),選擇菌落數(shù)在30到300個平板為準。個單位比“菌落數(shù)”更準確反映問題的實質(zhì)。從理論上認識,一個活細菌可以在條件合適的固體表面上形成一個菌落,但實際上遠非如此。例如,在環(huán)境因素作用下,每一個細菌的生活能力各不相同,會影響其在該條件下形成菌落的能力;又如,吸附于微小顆粒上的2個以上菌體或粘連在一起的菌團可能共同形成一個菌落等等。致使形成的菌落數(shù)遠遠低于實際的活菌數(shù)。因此目前可用菌落形成單位代替以往常用的“菌落數(shù)”單位。
平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個細胞,取一定量的稀釋樣液涂布到平板上,經(jīng)過培養(yǎng),由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落,即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細胞。統(tǒng)計菌落數(shù),根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是,由于待測樣品往往不宜*分散成單個細胞,所以,長成的一個單菌落也可能來自樣品中的2~3或更多個細胞。因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計數(shù)的結(jié)果,現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(cfu:colony-forming units),而不以菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。